目的基因的制备

天睿

　　（一）人工合成
        　　利用化学合成的基因片段和DNA连接酶的催化作用合成基因。自从DNA 合成仪问世以来，人工合成基因的效率更高。
        　　（二）逆向转录合成双链cDNA 基因
        　　从组织中分离mRNA，用逆转录酶催化合成单链cDNA，碱性条件水解去除mRNA 后，以此单链cDNA（ss‐cDNA）为模板，由DNA 聚合酶催化合成双链cDNA（ds‐cDNA），转化宿主细菌后形成cDNA 基因库，用探针从基因库筛选含目的基因的克隆。
        　　（三）从染色体DNA 分离目的基因
        　　染色体DNA用限制性核酸内切酶水解形成DNA 片段，与载体DNA重组，转化宿主细胞，制成基因组基因库，再用探针从基因库中分离含目的基因的克隆。
        　　（四）用PCR 技术扩增目的基因