目的基因的制备
(一)人工合成利用化学合成的基因片段和DNA连接酶的催化作用合成基因。自从DNA 合成仪问世以来,人工合成基因的效率更高。
(二)逆向转录合成双链cDNA 基因
从组织中分离mRNA,用逆转录酶催化合成单链cDNA,碱性条件水解去除mRNA 后,以此单链cDNA(ss‐cDNA)为模板,由DNA 聚合酶催化合成双链cDNA(ds‐cDNA),转化宿主细菌后形成cDNA 基因库,用探针从基因库筛选含目的基因的克隆。
(三)从染色体DNA 分离目的基因
染色体DNA用限制性核酸内切酶水解形成DNA 片段,与载体DNA重组,转化宿主细胞,制成基因组基因库,再用探针从基因库中分离含目的基因的克隆。
(四)用PCR 技术扩增目的基因
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